Validación de un método de transfección para el estudio de la función de miRNAs en la línea celular OCI-Ly18 de linfoma difuso de célula grande B

Abstract

[spa] Los microRNAs (miRNAs) son pequeñas moléculas de RNA no codificante implicadas en la regulación de un gran número de genes y juegan un papel importante en cáncer al expresarse de manera inusual. Sobre todo, son claves en tumores hematológicos como el linfoma difuso de célula grande B o DLBCL (del inglés diffuse large B-cell lymphoma), ya que se ha demostrado su implicación en los procesos de hematopoyesis y linfomagénesis. Un estudio previo llevado a cabo en el Hospital Universitario Son Espases (Palma de Mallorca) ha identificado varios miRNAs con papel pronóstico relevante para DLBCL. Con el fin de poder estudiar en un futuro la función de dichos miRNAs en células cancerígenas, el objetivo de este trabajo fue validar un protocolo eficaz para la transfección de miRNAs, mimetizadores o inhibidores, en la línea celular OCI-Ly18 de DLBCL. Para ello, de distintos métodos de transfección, como son la electroporación, el agente de transfección lipofectamina RNAiMAX y el agente de transfección Viromer®, se ha evaluado su eficacia, su efecto sobre la viabilidad celular y su utilidad para estudios de función de miRNAs utilizando la transfección de un oligofluorescente, un miRNA control negativo o un miRNA control positivo, respectivamente. Con el método de la electroporación empleando un pulso Square wave se obtuvieron niveles de eficacia similares a los obtenidos cuando la transfección se llevó a cabo con lipofectamina, con la que se obtuvo un porcentaje de transfección de 47,03% a las 48 h. La eficacia fue todavía mayor, alcanzando porcentajes de transfección de 76,17%, 85,6% y 93,12% al emplear los agentes de transfección Viromer® BLUE al 100% del volumen indicado por el fabricante durante 48 h, Viromer® GREEN al 100% durante 24 h y Viromer® GREEN al 50% durante 48 h, respectivamente. Los experimentos de viabilidad celular mostraron un efecto citotóxico de Viromer® GREEN al 100%, mientras que al ser utilizado al 50%, la viabilidad celular fue de un 99,6%. Posteriormente, se demostró que DXR disminuye significativamente y de manera dependiente de la dosis la viabilidad de las células OCILy18 transfectadas. Los resultados obtenidos indican que el método de transfección más eficaz fue el que utiliza como agente de transfección Viromer® GREEN al 50% del volumen indicado por el fabricante ya que con él se obtuvo el mayor porcentaje de transfección sin afectar a la viabilidad celular, lo que permitirá evaluar el efecto celular de mimetizadores o inhibidores de miRNAs en células OCI-Ly18, así como evaluar la sensibilidad a los fármacos del tratamiento R-CHOP de las células transfectadas con estos miRNAs mimetizadores e inhibidores.