Análisis funcional in silico de las posibles dianas de los miRNAs presentes en leche materna que varían durante la lactancia. Introducción a la validación de estas dianas

Abstract

[spa] Los microARNs (miARNs) son pequeñas cadenas de ARN (~22 nucleótidos) que regulan la expresión génica y la actividad de dianas específicas y juegan papeles cruciales en un gran número de procesos patológicos y fisiológicos. La alteración de la expresión y la actividad de ciertas dianas de ARNm es importante ya que este suceso se ha relacionado con la aparición de diferentes enfermedades metabólicas (obesidad, diabetes, hipertrigliceridemia, hipertensión…). Cantidades considerables de estos miARNs se encuentran en la leche materna de los mamíferos. La lactancia es un momento muy importante en la programación metabólica del neonato y puede tener un efecto directo y persistente sobre la salud. El objetivo del trabajo ha sido determinar las dianas moleculares de los miARNs cuyos niveles se sabe que varían durante la lactancia. En concreto se ha analizado in silico las dianas de los miARNs de rata (rattus norvegicus) y sus procesos biológicos: miR-222-3p, miR-200a-5p, miR-27a-3p y miR-103-3p. Además, se pretende optimizar y establecer un protocolo para validar en un modelo in vitro las dianas de un miARN de interés. Finalmente, los procesos biológicos de los genes diana resultan ser clave para el crecimiento y el desarrollo a parte de estar relacionados con vías metabólicas importantes y por eso estos miARNs pueden tener un papel importante en la programación metabólica del neonato. Y la técnica de extracción por Tri-Reagent y la cantidad de 50 ng han resultado ser los óptimos en el protocolo para la determinación de los miARNs y los genes diana en adipocitos maduros de la línea celular 3T3-L1.

[eng] MicroRNAs (miRNAs) are small RNA strands (~ 22 nucleotides) that regulate gene expression and the activity of specific targets and play critical roles in a large number of pathological and physiological processes. The alteration of the expression and the activity of certain mRNA targets is important since this event has been related to the appearance of different metabolic diseases (obesity, diabetes, hypertriglyceridemia, hypertension ...). Considerable amounts of these miRNAs are found in the breast milk of mammals. Breastfeeding is a very important moment in the metabolic programming of the newborn and can have a direct and persistent effect on health. The aim of the work was to determine the molecular targets of miRNAs whose levels are known to vary during lactation. Specifically, the targets of rat miRNAs (rattus norvegicus) and their biological processes have been analyzed in silico: miR-222-3p, miR-200a-5p, miR-27a3p and miR-103-3p. In addition, we intend to optimize and establish a protocol to validate the targets of a miRNA of interest in an in vitro model. Finally, the biological processes of the target genes turn out to be fundamental for growth and development, in addition to being related to important metabolic pathways. Therefore, these miRNAs may have a significant role in the metabolic programming of the newborn. The technique of extraction by Tri-Reagent and the amount of 50 ng have turned out to be the optimal ones in the protocol for the determination of miRNAs and target genes in mature adipocytes of the cell line 3T3-L1.