[cat] L’atròfia muscular espinal (SMA, de l’anglès Spinal Muscular Atrophy) és una
malaltia neurodegenerativa que afecta a les motoneurones alfa de la medul·la
espinal i és una de les principals causes genètiques de mort a la infància. La
causa de la malaltia és la reducció de la proteïna per a la supervivència de la
motoneurona, SMN (de l’anglès Survival Motor Neuron protein), provocada per
una deleció homozigòtica o mutació específica al gen per a la supervivència de
la motoneurona-1 (SMN1). Tot i que l'SMN s’expressa ubiquament, la seva
mancança causa la pèrdua específica de motoneurones. Quatre funcions han
estat assignades a l'SMN, tres d’elles són constitutives i necessàries per al
manteniment de totes les cèl·lules, i l'altra és específica de les neurones i està
relacionada amb el transport axonal de l'ARNm.
S’ha descrit que la reducció d'SMN provoca alteracions en la integritat del
citoesquelet. El citoesquelet d’actina juga un paper important en la migració
cel·lular. A més a més, la reducció en l’expressió de l'SMN provoca defectes en
la neuritogènesi de l’hipocamp, associats a alteracions en els nivells d’expressió
de les proteïnes requerides per als processos de creixement cel·lular i migració.
Això suggereix que la patologia de l'SMA podria estar associada a alteracions en
la capacitat de migració cel·lular. A la línia cel·lular d’astroglioma humà
U87MG en la que s’ha disminuït l’expressió d'SMN amb shRNA, s’ha
caracteritzat l'afectació de la seva migració com a conseqüència de la reducció
d'SMN. La reducció d'SMN indueix defectes en la migració cel·lular, s’observa
que la via RhoA/ROCK està activada i la profilina incrementa la seva expressió.
L’activació de la via RhoA/ROCK causa la fosforilació de la cadena lleugera de
la miosina, proteïna que és coneguda per promoure la interacció de la miosina
amb l’actina incrementant la velocitat del flux retrògrad als fil·lopodis i
lamel·lipodis, procés que dificultaria la migració cel·lular.
A la medul·la espinal lumbar del model murí SMNΔ7 d’SMA s’han descrit
canvis patològics a les motoneurones, com la reducció del soma i la fosforilació
del neurofilament, ambdós previs a la pèrdua de motoneurones a l’estadi final.
En aquest model s’ha observat un increment d’astròglia al voltant de les
motoneurones en l’estadi presimptomàtic, i una astrogliosi generalitzada a la
medul·la espinal lumbar en l’estadi simptomàtic. Per contra, la presència
de micròglia només es veu incrementada en l’estadi simptomàtic. A les
motoneurones de la medul·la espinal lumbar d’aquest model a l’estadi
simptomàtic, s’ha descrit una reducció dels botons presinàptics, en els quals s’ha
observat un increment a la fosforilació de la cadena lleugera de la miosina.
Alhora, s’ha detectat una expressió incrementada de la isoforma neuronal de
l'òxid nítric sintasa a motoneurones i interneurones, però la isoforma induïble
només s’ha observat a interneurones, a l'estadi simptomàtic.
La via cel·lular de senyalització Notch i l’expressió incrementada dels seus
lligands, Jagged i Delta, han estat àmpliament relacionades amb defectes a la
neuritogènesi. A més a més, defectes a la neuritogènesi han estat directament
vinculats amb la disminució d'SMN a models d'SMA. Malgrat això, la possible
implicació de la via de senyalització cel·lular de Notch a la malaltia SMA no
havia estat determinada. Després de la reducció d'SMN a la línia cel·lular
d’astroglioma U87MG, s’han observat nivells incrementats dels lligands Jagged i
Delta, del receptor Notch i del seu fragment actiu, NICD. Finalment, s’ha fet
servir el model murí SMNΔ7 per a determinar si la glia o les motoneurones de la
medul·la espinal lumbar presenten una activació incrementada de la via de
senyalització de Notch. S’ha descrit una expressió incrementada dels lligands
Jagged i Delta en astròcits en l’estadi simptomàtic. També s’han trobat nivells
elevats del fragment actiu intracel·lular del receptor Notch, NICD, a
motoneurones, astròglia i micròglia, associats a una expressió incrementada de
Jagged i Delta a l’astròglia, en l’estadi simptomàtic. Per altra banda, s’ha
observat que les motoneurones del ratolí SMNΔ7 que presenten nivells elevats
del fragment actiu intracel·lular del receptor Notch, expressen menys
Neurogenina, proteïna que està íntimament relacionada amb la neuritogènesi.
La reducció de la proteïna SMN en models in vitro i in vivo s’ha associat amb
l’activació de les vies de senyalització cel·lular RhoA/ROCK i Notch, que resulta
en alteracions del citoesquelet d’actina i en la reducció de l'expressió de
Neurogenina, la qual cosa provoca defectes a la migració cel·lular, pèrdua de les
sinapsis a les motoneurones espinals i reducció de la mida del soma. A més a
més, el procés d’astrogliosi en el ratolí SMNΔ7 podria contribuir a la creació
d'un ambient perjudicial per a les motoneurones en els teixits d'SMA. Per tant,
els nostres resultats suggereixen que la patogènia a l'SMA no és causada per un
únic procés, sinó per la convergència de diversos processos patogènics a les
motoneurones i a la glia que deriven en disfuncions de les motoneurones i
posterior mort d’aquestes.
[eng] Spinal muscular atrophy (SMA) is a neurodegenerative disease that affects alpha
motoneurons in the spinal cord, being one of the leading genetic causes of death
in childhood. The trigger of this disease is a reduction in the expression of the
survival of motor neuron protein, SMN, owing to homozygous deletion or
specific mutations in the survival motoneuron-1 (SMN1) gene. Although SMN is
ubiquitously expressed, its lack specifically causes spinal motoneuron loss. Four
functions have been assigned to SMN, three house-keeping functions, related to
RNA splicing in all cells, and one neuron-specific, related to axonal transport of
mRNA.
SMN depletion has been described to cause alterations in cytoskeletal integrity.
The actin cytoskeleton plays an important role in cell migration. Also, reduced
expression of SMN induces impaired hippocampal neurogenesis, associated to
alterations in the expression levels of proteins required for cell growth and
migration. This suggests that alterations in cellular migration could be related to
SMA. In the U87MG human astroglioma cell line depleted of SMN via shRNA,
we characterized the change in migration dynamics induced by SMN depletion.
We determined that SMN reduction causes reduced cell migration, associated to
RhoA/ROCK signalling pathway activation and profilin overexpression. The
activation of RhoA/ROCK leads to myosin light chain phosphorylation, which
is known to promote interaction of myosin light chain with actin, increasing the
speed of retrograde flow in filopodia and lamellipodia, thus impairing cell
migration.
In the lumbar spinal cord of the SMNΔ7 mouse model, we described
pathological changes in motoneurons, such as soma reduction and
neurofilament phosphorylation, previous to motoneuron loss at end-stage. In
this model, we observed enhanced astrogliosis surrounding motoneurons at presymptomatic stage, and generalized astrogliosis in lumbar spinal cord at
symptomatic stage. In contrast, microgliosis was only enhanced at symptomatic
stage. In lumbar spinal cord motoneurons of this model, at symptomatic stage,
we described a reduction in the number of pre-synaptic boutons, in which
increased phosphorylation of myosin light chain was found. In addition, we
observed increased expression of the neuronal isoform of the nitric oxide
synthase in motoneurons and in interneurons, but the inducible isoform of nitric
oxide synthase only was found in interneurons of the lumbar spinal cord at
symptomatic stage.
Notch signalling pathway and the overexpression of its ligands, Jagged and
Delta, have been widely related to neuritogenesis. Moreover, neuritogenesis
defects have been directly related to SMN reduction in models of SMA.
However, the possible involvement of the Notch signalling pathway in the
pathology of SMA has not been determined yet. After depletion of SMN in
U87MG astroglioma cell line, we observed increased levels of Jagged and Delta
ligands, Notch receptor and its active fragment, NICD. Thus, we used the
SMNΔ7 mouse model to determine whether the glia or motoneurons in the
lumbar spinal cord exhibited activation of the Notch signalling pathway. We
found astroglial overexpression of Jagged and Delta ligands of Notch receptor at
symptomatic stage. Increased levels of the active intracellular fragment of the
Notch receptor, NICD, were also found in motoneurons, astroglia and microglia,
associated to astroglial Jagged and Delta increased expression, at symptomatic
stage. We observed that the motoneurons from SMNΔ7 mice at symptomatic
stage, overexpressing the active fragment of Notch, expressed less Neurogenin,
a protein known to be involved in neuritogenesis.
The depletion of SMN protein in in vitro and in vivo models is associated to an
increased activation of the RhoA/ROCK and Notch signalling pathways
resulting in actin cytoskeleton disturbance and decreased Neurogenin
expression, thus causing cell migration impairment, loss of synapses onto spinal
motoneurons and soma reduction. In addition, the observed gliosis found in the
SMNΔ7 mice could contribute to create a detrimental environment in SMA
tissue. Therefore, our results suggest that SMA pathogenesis is not only a single
process, but a convergence of pathogenic processes in motoneurons and glia
which lead to motoneuron specific impairment and later death.