[spa] Antecedentes: La Inmunodeficiencia Variable Común (IVC) consiste en un conjunto heterogéneo de trastornos caracterizados por un déficit primario de anticuerpos séricos de tipo IgG junto con IgM y/o IgA y pobre respuesta a la vacunación. Los pacientes presentan infecciones bacterianas recurrentes y en algunos casos, procesos autoinmunes, linfoproliferativos y/o gastrointestinales, entre otros. Entre las alteraciones descritas, el hallazgo más consistente es un defecto a nivel de diferenciación de los linfocitos B a células de memoria o plasmáticas productoras de anticuerpos. La vía de señalización (PI3K)/AKT/mTOR/S6 es esencial para el crecimiento, proliferación, diferenciación y supervivencia de diferentes poblaciones del sistema inmunitario, por lo que alteraciones en la misma podrían comprometer la supervivencia y diferenciación de los linfocitos B de pacientes con IVC.
Métodos: Se ha llevado a cabo la estandarización de un ensayo por citometría de flujo para evaluar la vía de señalización mTOR mediante la detección de los niveles de fosforilación de la proteína S6. Una vez estandarizado, a partir de muestras de sangre periférica, se han estudiado los niveles, basales y tras estimulación, de fosforilación de la proteína S6 en linfocitos B vírgenes y de memoria de controles sanos y pacientes con IVC.
Resultados: Describimos, en linfocitos B vírgenes de controles sanos, un incremento de los niveles de fosforilación de S6 tras estimulación con anti-BCR. Los pacientes con IVC estudiados parecen presentar una alteración de los niveles de fosforilación de S6 tras estimulación con anti-BCR e IL-21. Hay que considerar que se trata de un estudio preliminar con un tamaño de muestra limitado.
Conclusiones: Se ha logrado la estandarización de un ensayo por citometría de flujo para el estudio de la fosforilación de la proteína S6 en respuesta a diferentes estímulos. Este ensayo tiene gran aplicabilidad en el campo de las inmunodeficiencias primarias.
[eng] Background: Common Variable Immunodeficiency (CVID) is a heterogeneous disorder characterized by reduced IgG serum levels with decreased IgM and/or IgA and poor response to vaccination. Patients suffer from recurrent respiratory infections, accompanied by autoimmunity, lymphoproliferative and/or gastrointestinal processes. The most consistent finding is a defect at the level of B lymphocyte differentiation to memory or plasma cells. The (PI3K)/AKT/mTOR/S6 signaling pathway is essential for the growth, proliferation, differentiation and survival of different immune system populations; therefore, alterations in this pathway could compromise the survival and differentiation of B lymphocytes in patients with CVID.
Methods: We have standardized a flow cytometry assay to evaluate the mTOR signaling pathway by detecting the phosphorylation levels of the S6 protein. Once standardized, the basal and post-stimulation levels of S6 protein phosphorylation in naive and memory B lymphocytes from healthy controls and CVID patients were studied from peripheral blood samples.
Results: We describe, in naive B cells from healthy controls, an increase in S6 phosphorylation levels after stimulation with anti-BCR. The CVID patients studied seem to show an alteration of S6 phosphorylation levels after stimulation with anti-BCR and IL-21. It should be considered that this is a preliminary study with a limited sample size.
Conclusions: Standardization of a flow cytometry assay for the study of S6 protein phosphorylation in response to different stimuli has been achieved. This assay has great applicability in the field of primary immunodeficiencies.