Bloqueo del reciclaje del peptidoglicano en Pseudomonas aeruginosa: construcción y caracterización de un mutante Knockout en la ligasa Mpl

Abstract

[spa] El actual incremento de casos de infección por Pseudomonas aeruginosa resistente a los antibióticos es un problema clínico-epidemiológico que reduce progresivamente nuestro arsenal terapéutico útil. Por este motivo, son muchos los esfuerzos para encontrar nuevas dianas terapéuticas para diseñar fármacos anti-pseudomónicos eficaces, de carácter clásico o incluso algunos más innovadores, como las denominadas terapias antivirulencia. Éstas están orientadas a debilitar la patogenia de la bacteria, haciendo las consecuencias clínicas mucho menos graves para el paciente e incrementando las posibilidades de eliminación por parte del sistema inmune. En el presente trabajo se pretendió evaluar una diana con potencial aplicación en este contexto, pues por resultados preliminares, se hipotetizó que la ligasa citosólica Mpl de P. aeruginosa, implicada en el reciclaje de la pared celular y en la resistencia a β-lactámicos, podría ser causante de un drástico incremento en la sensibilidad a la lisozima del hospedador. En tal caso, Mpl quedaría habilitada como una diana perfecta para ser atacada por futuros fármacos que debilitarían a la bacteria frente a la lisozima del paciente, promoviendo el aclaramiento de la infección. Por ello, en este trabajo se ha llevado a cabo la inactivación del gen mpl en P. aeruginosa mediante doble recombinación alélica, para poder analizar el fenotipo del mutante obtenido en cuanto a su perfil de resistencia a los β–lactámicos y a la lisozima. Si bien es cierto que los resultados finales no han permitido ligar el noqueo de mpl con un aumento de sensibilidad a la lisozima, este trabajo supone un manual exhaustivo acerca del proceso de inactivación génica en P. aeruginosa, que incluye detalladamente multitud de técnicas de biología molecular y microbiología clásica, así como las soluciones para solventar los problemas experimentales que han ido surgiendo a lo largo del proceso de noqueo génico.