Estudiar la función de la proteína PATJ en neutrófilos en el contexto del Ictus isquémico

Abstract

[spa] El ictus es una enfermedad cerebrovascular que se produce debido a una rotura u obstrucción en los vasos sanguíneos, reduciendo el flujo de sangre al cerebro. En la actualidad, el ictus es la segunda causa de muerte en el mundo y el número continúa creciendo debido al aumento de la población y el envejecimiento. Como consecuencia de la lesión isquémica se induce la respuesta inflamatoria, siendo los neutrófilos los primeros leucocitos infiltrantes. Debido a la elevada prevalencia del ictus isquémico, se han estudiado genes y moléculas implicadas en la recuperación de la lesión isquémica. PATJ es uno de los genes identificados en los neutrófilos, cuya infra-expresión se relaciona con un peor pronóstico funcional. Con la finalidad de estudiar la potencial relación entre la proteína PATJ y los procesos de migración, adhesión e infiltración en los neutrófilos, se generaron cultivos celulares de neutrófilos primarios y se manipuló la expresión del gen PATJ mediante transfección de RNA de interferencia anti-PATJ. Los niveles de expresión de PATJ se analizaron por RT-PCR y los estudios funcionales de transmigración a través de células endoteliales se realizaron utilizando cámaras de boyden seguido de contaje por citometría de flujo. Los resultados sugieren que los neutrófilos que infra-expresan PATJ presentan mayores tasas de adherencia e infiltración. Además, se estudió la expresión de PATJ en respuesta a diferentes estímulos quimioatrayentes como C-GSF o IL-8, medida por WB. Los resultados demostraron PATJ se modula en respuesta a estímulos quimioatrayentes, y que dicha modulación sigue un patrón similar al de proteínas constituyentes del citoesqueleto de actina, tales cómo b-actina o a-smooth actina. Nuestros resultados sugieren que PATJ en los neutrófilos regula procesos como la migración, adherencia e infiltración, mediante la modulación del citoesqueleto de actina.

[cat] L'ictus és una malaltia cerebrovascular que es produeix a causa d'un trencament o obstrucció dels vasos sanguinis, reduint el flux de sang al cervell. Actualment, l'ictus és la segona causa de mort al món i el nombre continua creixent a causa de l'augment de la població i l'envelliment. Com a conseqüència de la lesió isquèmica s'indueix la resposta inflamatòria, sent els neutròfils els primers leucòcits infiltrants. A causa de l'elevada prevalença de l'ictus isquèmic, s'han estudiat gens i molècules implicades a la recuperació de la lesió isquèmica. PATJ és un dels gens identificats en els neutròfils, la infraexpressió dels quals es relaciona amb un pitjor pronòstic funcional. Amb la finalitat d'estudiar la relació potencial entre la proteïna PATJ i els processos de migració, adhesió i infiltració als neutròfils, es van generar cultius cel·lulars de neutròfils primaris i es va manipular l'expressió del gen PATJ mitjançant transfecció d'RNA d'interferència anti PATJ. Els nivells d'expressió de PATJ es van analitzar per RT-PCR i els estudis funcionals de transmigració a través de cèl·lules endotelials es van fer utilitzant càmeres de Boyden seguit de comptatge per citometria de flux. Els resultats suggereixen que els neutròfils que infraexpressen PATJ presenten majors taxes d'adherència i infiltració. A més, es va estudiar l'expressió de PATJ en resposta a diferents estímuls quimioatrayents com ara C-GSF o IL-8, mesurada per WB. Els resultats van demostrar que PATJ es modula en resposta a estímuls quimioatrayents, i que aquesta modulació segueix un patró similar al de proteïnes constituents del citoesquelet d'actina, com ara b-actina o a smooth actina. Els nostres resultats suggereixen que PATJ als neutròfils regula processos com la migració, adherència i infiltració, mitjançant la modulació del citoesquelet d'actina

[eng] Stroke is a cerebrovascular disease that occurs due to a rupture or obstruction in the blood vessels, reducing blood flow to the brain. Stroke is currently the second leading cause of death in the world and its incidence keeps increasing due to population growth and aging. Because of the ischemic injury, the inflammatory response is induced, with neutrophils being the first infiltrating leukocytes. Due to the high prevalence of ischemic stroke, genes and molecules involved in recovery from ischemic injury have been studied. PATJ is one of the genes identified in neutrophils, whose under-expression is related to a worse functional prognosis. To study the potential relationship between the PATJ protein and the processes of migration, adhesion and infiltration in neutrophils, cell cultures of primary neutrophils were generated and the expression of the PATJ gene was manipulated by transfection of anti-PATJ interfering RNA. PATJ expression levels were measured by RT-PCR and functional studies of transmigration through endothelial cells were performed using Boyden chambers followed by flow cytometric counting. The results suggest that neutrophils that under-express PATJ have higher rates of adherence and infiltration. In addition, the expression of PATJ in response to different chemoattractant stimuli such as C-GSF or IL-8, measured by WB, was also studied. The results showed that PATJ is modulated in response to chemoattractant stimuli, and that this modulation follows a pattern similar to that of constituent proteins of the actin cytoskeleton, such as b-actin or a-smooth actin. Our results suggest that PATJ in neutrophils regulates processes such as migration, adhesion and infiltration, by modulating the actin cytoskeleton.