Estudio de ácidos grasos poliinsaturados de síntesis para el tratamiento del cáncer

Abstract

[esp] Los ácidos grasos poliinsaturados alfa-hidroxilados han mostrado tener capacidad antitumoral, particularmente en glioma. El 2OHOA, actualmente en ensayos clínicos, ejerce su poder terapéutico a nivel de la membrana plasmática, de acuerdo con los preceptos de la TLM. La modificación de la composición, estructura y organización de la membrana de las células de glioma hace que se altere la señalización celular llevando a la célula a la parada de ciclo, diferenciación, autofagia y eventualmente la muerte por apoptosis. Del mismo modo, otros ácidos grasos hidroxiderivados, actúan alterando la organización de la membrana. El 2OHDHA, hidroxiderivado del ácido graso con actividad antitumoral DHA, aumenta su potencial respecto al ácido graso natural y parece ser eficaz contra la enfermedad de Alzheimer. En este trabajo se evaluó el potencial terapéutico frente al glioma del TGM6, un triglicérido sintético compuesto por 2OHDHA, mediante un estudio in vitro con líneas celulares de glioblastoma humano SF-295 y U251. Para ello se evaluó la proliferación celular de las células tras el tratamiento con diferentes dosis de TGM6 mediante un ensayo XTT, observándose en ambas una inhibición de la proliferación de forma dosis-dependiente. La disminución de la proliferación también fue evidente por la observación microscópica del nivel de confluencia, en la que también se vieron cambios morfológicos que parecen apuntar hacia la diferenciación de las células tumorales. Para tratar de caracterizar los mecanismos subyacentes a la muerte celular, se detectaron mediante Western Blot marcadores de apoptosis, autofagia, parada de ciclo y estrés reticular con respuesta a proteínas mal plegadas (ER/UPR); y se realizó un análisis del ciclo celular por citometría de flujo. De esta forma se observó en ambas líneas un aumento del marcador de autofagia de LC3II, pero no de Beclin-1 ni Atg7. En la línea SF-295 se observó una población muy grande de células en parada del ciclo celular en fase G2/M, de forma semejante a lo observado en células de glioma tratadas con 2OHOA. En las células U251 se observó un aumento de la apoptosis, evidenciado por un gran número de células con contenido de DNA menor al de G0/G1, aunque esto no se correlaciona con la ausencia de PARP escindida. No se encontraron diferencias en los marcadores de ER/UPR. En definitiva, a pesar de transcurrir por vías diferentes (que precisan de mayores estudios para ser esclarecidas), el TGM6 tuvo un efecto antitumoral en ambas líneas, lo que apunta a que puede ser un fármaco eficaz para el tratamiento de glioblastomas.

[eng] Research regarding 2-hydroxylated unsaturated fatty acids has shown clear evidence of their antitumor effectivity, particularly against glioma. 2OHOA, which is currently under clinical trial, acts within the principles of membrane-lipid therapy. This synthetic drug changes membrane composition, structure and organization consequently altering the cell signalling pathways. This leads to cell cycle arrest, cell differentiation, autophagy, and eventually apoptotic cell death. The hydroxyl-derivative compound 2OHDHA has shown stronger therapeutic effects on Alzheimer’s disease than its natural fatty acid DHA. Many anticancer effects are also attributed to DHA, although it is not well established as a drug. In the present investigation we made a brief assessment on the therapeutic potential against glioma of TGM6, a synthetic triglyceride with three esterified 2OHDHA. For this purpose, we performed an in vitro study with human glioblastoma cell lines SF-295 and U251. After different doses of TGM6, cell proliferation and death were assessed with an XTT essay. TGM6 inhibited the proliferation and increased cell death in a time and dose-dependent manner. Morphological changes were also noticed, which may suggest that TGM6 induced cell differentiation of tumour cells. In order to assess the underlying causes of cell death, proteins related to apoptosis, autophagy, cell cycle arrest, endoplasmic reticulum stress (ER) and unfolded protein response (UPR) were detected by Western Blot. Additionally, cell cycle was evaluated by measuring the intracellular DNA content. Autophagy related LC3-II protein was up-regulated in both SF295 and U251 cell lines. On the contrary, no difference was revealed on Beclin-1 nor Atg7. TGM6 induced cell cycle arrest in the G2/M phase on SF-295 cells. As for U251 cells, a sub-G0 peak was detected, which may indicate apoptotic cell death. However, western blotting did not reveal PARP cleavage in neither cell lines. No difference in ER/UPR markers was found. TGM6 has a strong effect on both cell lines, inhibiting proliferation and causing cell death, even if the pathways are not clear. This suggests that TGM6 could be an efficient antitumor drug against glioblastomas, but further studies need to be performed.