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[spa] La comprensión de los procesos moleculares que conllevan a la modificación
estructural proteica y en numerosos casos, a su agregación, es clave para la comprensión
de los mecanismos que implican el desarrollo de gran número de patologías
neurodegenerativas. Una de ellas es la encefalitis espongiforme, conocida en humanos
como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob. Dicha patología aparece debido a la
modificación estructural de la proteína priónica (PrP), la cual posteriormente agrega y
se deposita sobre las neuronas, causando su muerte.
El dominio H2H3 (formado por las hélices -2 y 3) presenta la misma estructura
tanto aislado, como cuando está integrado en el total de la proteína. A su vez, es capaz
de reproducir el patrón de agregación de la proteína nativa, por lo que constituye una
entidad independiente y de gran relevancia dentro del PrP. Por todo ello, la comprensión
del mecanismo mediante el cual el H2H3 modifica su estructura, generando especies
parcialmente plegadas que inician el proceso de agregación, es de vital importancia para
entender cómo se desarrollan las patologías asociadas al PrP, pero también para el
diseño de inhibidores efectivos de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.
En este trabajo se ha estudiado el proceso de desplegamiento y posterior
replegamiento del domino H2H3 del PrP ovino. Inicialmente, se utilizaron las
espectroscopias de fluorescencia y de dicroísmo circular para obtener una idea
macroscópica de la estabilidad del H2H3 a diferentes temperaturas. Posteriormente, se
analizó a nivel residual y mediante el uso de la RMN (concretamente mediante la
adquisición de espectros 15N-HSQC a diferentes temperaturas) la estabilidad térmica, es
decir estructural, de cada residuo y como afectaba a ella su entorno particular. Para la
gran mayoría de residuos se determinaron los parámetros termodinámicos de
desplegamiento y replegamiento. Entre otros aspectos, los resultados obtenidos
demuestran que el desplegamiento se inicia en el extremo N-terminal del H3, para
proseguir ya a temperaturas mayores y de manera simultánea sobre los extremos Nterminal
del H2 y C-terminal del H3. El extremo C-terminal de H2 es la región de
mayor estabilidad. El replegamiento parece ocurrir en el mismo orden secuencial, pero
mediante un proceso ligeramente diferente. |
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