Evaluación de medios de cultivo selectivos y diferenciales en el análisis de Escherichia coli en aguas, por el método de filtración por membrana.

Abstract

[spa] El control de calidad determina el valor o la aceptabilidad de los alimentos o aguas. En las aguas, es imprescindible conocer la presencia y la concentración a la que están los microorganismos, para determinar su calidad. Pero como existe cierta dificultad para determinar la presencia de ciertos patógenos, se utilizan microorganismos indicadores que se comportan de manera similar. Entre estos microorganismos indicadores está el grupo de bacterias coliformes y dentro de este grupo se encuentra Escherichia coli. El recuento de E. coli y de bacterias coliformes en el Centro Balear de Biología Aplicada (CBBA), se basa en la ISO 9308-1:2014. Sin embargo, no se hace uso del medio de cultivo recomendado, Agar Cromogénico para Coliformes (CCA, Chromogenic Coliform Agar), si no, del Agar Levine o Eosina azul de metileno (EMB, Eosin Methylene Blue) para el recuento de E. coli. Por lo tanto, la hipótesis de este trabajo plantea que incubando los filtros tanto en una placa de EMB como en una de CCA, se obtendrán mayores recuentos de colonias de E. coli en las placas de CCA que en las placas de EMB. Se analizaron 300 muestras, de las cuales solo 29 tuvieron un recuento positivo de E. coli. Para confirmar las presuntas colonias, se realizó la prueba del indol a muestras aleatorias, elegidas al azar. Una de las primeras observaciones fue que se contaron muchos falsos positivos usando el medio EMB, ya que todas las colonias aparecieron de color rojo y el brillo verde metalizado no se observó. Realizar la prueba del indol era imprescindible. Mediante el sistema de identificación RapIDTM ONE Panel, se pudo identificar uno de los microorganismos perteneciente a los falsos positivos. Con un 99,9% de probabilidad se trataba de Citrobacter freundii, que aislado en el medio EMB tiene la misma apariencia que E. coli. Gracias al programa GraphPad® , se realizó la prueba de Shapiro-Wilk, para comprobar la normalidad. Con un pvalor<0,0001 (<0,05) se comprobó que se trataban de variables no paramétricas, por lo que se aplicó la prueba de Wilcoxon que con un pvalor de 0,0347 (<0,05) mostró que había diferencias significativas entre el recuento en EMB y el recuento en CCA. Por lo tanto, usando el medio CCA, tal como se recomienda en la renovación de la ISO 9308-1, se obtienen mayores recuentos de E. coli.

[eng] Quality control determines the value and acceptance of food and water. To determine water quality, it is essential to know the presence and concentration of the microorganisms in water. But there is a certain difficulty to determine the presence of some microorganisms, which makes it necessary to use indicator microorganisms that behave in a similar way. Some of these are coliform bacteria and Escherichia coli, which belongs to that group. The Centro Balear de Biología Aplicada (CBBA), bases the count of E. coli and coliform bacteria on the ISO 9308-1:2014. Nevertheless, they do not use the Chromogenic Coliform Agar (CCA) as recommended, but Eosin Methylene Blue (EMB) medium. So, the hypothesis of this work poses that incubating the membrane filters on both, an EMB plate and on a CCA plate, you obtain higher E. coli counts on the CCA plate. Three-hundred samples were analysed, from which 29 had a positive count. To confirm the suspected colonies, an indole test was performed on samples chosen randomly. One of the first observations was that many false positives were counted in EMB medium, due to the red coloured colonies and the lack of the metallic-green shine. Performing the indole test is essential. For the identification of the false positive colonies, an identification system called RapIDTM ONE Panel was used. With a 99,9% probability it confirmed the presence of Citrobacter freundii, which has the same appearance as E. coli in EMB medium. Thanks to GraphPad® programme, a ShapiroWilk test was performed to confirm the normality. With a pvalue<0,0001 (<0,05) it could be determined that the variables were non parametric, which is why a Wilcoxon test was carried out and a pvalue of 0,0347 (<0,05) was obtained, and it could be confirmed that there are significant differences between the counts on EMB medium and CCA. Accordingly, using CCA medium, as recommended in the renovation of the ISO 9308-01, higher E. coli counts are obtained.