Preparació de derivats de cobalamina i estudi de la seva interacció amb el ribocommutador de Klebsiella Pneumoniae

Abstract

[cat] Els ribocommutadors són seqüències altament estructurades situades a l’extrem 5’-UTR de certs mRNA i tenen com a funció la regulació de l’expressió gènica, degut a un canvi conformacional provocat per la unió amb el seu metabòlit natural. Des de fa uns anys s’ha estudiat el ribocommutador de B12 de Klebsiella Pneumoniae que presenta afinitat per l’adenosilcobalamina (Coenzim B12). Estudiar la seva interacció amb altres derivats de B12 ajudarà a entendre millor el seu funcionament i seguir amb el seu estudi. L’objectiu principal d’aquest TFM és realitzar la síntesi de l’àcid cobíric mitjançant la hidròlisi de la Vitamina B12 i el seu estudi d’interacció amb el ribocommutador de B12 de Klebsiella Pneumoniae, per tal de conèixer la importància dels lligands axials damunt la funció reguladora. La síntesi de l’àcid cobíric es realitza mitjançant la hidròlisi en medi àcid de la Vitamina B12. Després de la hidròlisi, és necessari separar els diferents derivats de B12 que s’obtenen; aquesta es realitza amb una columna cromatogràfica de sílice C18-RP, emprant un gradient H2O:acetonitril com a eluent. S’han identificat 4 derivats interessants: l’àcid dicianocobíric, l’àcid dicianoneocobíric, la dicianocobinamida i la dicianoneocobinamida, mitjançant NMR (ressonància magnètica nuclear, nuclear magnetic resonance en anglès) i HRMS (espectrometria de masses d’alta resolució, en anglès, high resolution mass spectrometry). Posteriorment, s’ha realitzat la mesura de la interacció entre el ribocommutador i els derivats de B12 obtinguts mitjançant estudis in vivo amb mCherry (proteïna fluorescent). Aquests resultats es poden comparar amb els obtinguts usant cobalamines completes, per tal d’estudiar la importància del lligand apical inferior de les cobalamines.