Posada a punt de la metodologia necessària per a la detecció de miRNAs circulants en vesícules extracel·lulars per al diagnòstic de sèpsia

Abstract

[cat] La sèpsia és una de les principals causes de mort al món i també suposa un problema a nivell de salut pública. La seva detecció a temps comporta grans beneficis, demostrant-se la necessitat de trobar biomarcadors de diagnòstic primerenc. Estudis recents mostren que durant aquesta patologia s’alteren els nivells de determinats miRNAs, els quals poseeixen un gran potencial com a biomarcadors tant de diagnòstic com de pronòstic de la sèpsia. A més, tenen l’avantatge d’estar continguts en vesícules extracel·lulars (EVs), fet que evita la seva degradació. En aquest treball, es van comparar dos mètodes d’aïllament de EVs: la cromatografia d’exclusió per grandària (SEC) i la captura per immunoafinitat mitjançant perles magnètiques (Magnetic beads), per a continuació detectar la presència de miRNAs específics. Tot i no haver obtingut resultats significatius, la captura per immunoafinitat va semblar ser més eficient. Finalment, es va aïllar el RNA de les EVs de mostres control i de mostres de pacients sèptics amb l’objectiu de comparar-ne els nivells de miR-16-5p. Després de l’amplificació específica d’aquest miRNA mitjançant qRT-PCR, es va observar un cert augment dels seus nivells en pacients sèptics, però els resultats no foren estadísticament significatius, probablement a causa del reduït nombre de mostres analitzades.

[spa] La sepsis es una de las principales causas de muerte en el mundo y también supone un problema a nivel de salud pública. Su detección a tiempo conlleva muchos beneficios, demostrando la necesidad de encontrar biomarcadores de diagnóstico temprano. Estudios recientes muestran que durante dicha patología se alteran los niveles de determinados miRNAs, los cuales poseen un gran potencial como biomarcadores tanto de diagnóstico como de pronóstico de la sepsis. Además, cuentan con la ventaja de encontrar-se en vesículas extracelulares (EVs), evitando así su degradación. En este trabajo, se compararon dos métodos de aislamiento de EVs: la cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) y la captura por immunoafinidad con perlas magnéticas (Magnetic beads), para después detectar la presencia de miRNAs específicos. Aunque no se obtuvieron resultados significativos, la captura por immunoafinidad pareció ser más eficiente. Finalmente, se aisló el RNA de las EVs de muestras control y de muestras de pacientes sépticos con el objetivo de comparar los niveles de miR-16-5p. Después de la amplificación específica del dicho miRNA mediante qRT-PCR, se observó un cierto aumento de sus niveles en pacientes sépticos, pero los resultados no fueron estadísticamente significativos, probablemente debido al reducido nombre de muestras analizadas.

[eng] Sepsis is one of the main causes of death in the world and it poses a public health problem. It can be very beneficial if sepsis is detected on time, so it is necessary to find early diagnostic biomarkers for this disease. Recent studies prove the alteration of specific miRNAs levels during sepsis, which show a huge potential as diagnostic and prognostic biomarkers. Furthermore, they have the advantage of being found into extracellular vesicles (EVs), so their degradation is avoided. In this work, two different methods of EVs isolation were compared: Size-Exclusion Chromatography (SEC) and immunoaffinity capture with magnetic beads and then detect the presence of specific miRNAs. Although the results were not statistically significant, immunoaffinity capture seemed more efficient. Finally, RNA of EVs from control samples and septic patients’ samples was isolated with the objective of comparing miR-16-5p levels. After specific amplification of this miRNA with qRT-PCR, increased levels were observed in septic patients, but these results were not statistically significant, probably due to the reduced number of samples that were analysed.