Estudio de la función reguladora de la proteína PATJ y el complejo Crumbs sobre el citoesqueleto de actina y su implicación en el pronóstico funcional del ictus isquémico

Abstract

[spa] El ictus es una enfermedad cardiovascular que comporta una de las principales causas tanto de mortalidad como de discapacidad en adultos en España. Supone además una gran carga tanto económica como sanitaria. Estudios recientes han descubierto que la variante rs76221407 del gen PATJ está asociada a peor pronóstico funcional en pacientes después de sufrir un ictus isquémico. El grupo receptor observó que después del ictus se produce una infraexpresión de PATJ, y que esta parece promover cambios morfológicos en las células endoteliales a favor procesos de migración celular y angiogénesis. PATJ es una proteína de andamiaje que, junto con el complejo Crumbs, regula la polaridad celular y participa en la formación de las uniones oclusivas. Actualmente no conocemos los mecanismos por los cuales PATJ y Crumbs podrían regular estos procesos en células endoteliales. La hipótesis de este trabajo es que PATJ participa junto con Crumbs en los procesos de permeabilización, migración y angiogénesis de los capilares sanguíneos mediante la modulación del citoesqueleto de actina. Para estudiar la potencial relación entre PATJ y el citoesqueleto de actina se han planteado tres objetivos: 1. Estudiar la expresión de diferentes componentes del citoesqueleto en células endoteliales deplecionadas de PATJ, 2. Determinar el ratio de actina Filamentosa/ Globular dependiente de la expresión de PATJ y 3. Estudiar los niveles de expresión de las proteínas YAP/TAZ en el núcleo y en el citosol dependiente de la expresión de PATJ. Mediante el uso de técnicas de western blot, inmunofluorescencia y subraccionamiento celular, en el presente trabajo se ha comprobado que la infraexpresión de PATJ disminuye el ratio de actina F/G y promueve la translocación de los cofactores de transcripción YAP/TAZ al núcleo en células endoteliales, demostrando así el papel de PATJ en la regulación del citoesqueleto de actina y su posible relación la vía Hippo.

[eng] Stroke is one of the main causes of both mortality and disability in adults in Spain. It also represents a great economic and health burden. Recent studies have found that the rs76221407 variant of the PATJ gene is associated with a worse functional prognosis in patients after suffering an ischemic stroke. The recipient group observed that PATJ 4 underexpression occurs after stroke, and this fact promotes morphological changes in endothelial cells favoring cell migration and induction of angiogenesis. PATJ is a scaffolding protein that, together with the Crumbs complex, regulates cell polarity and participates in the formation of tight junctions. We currently do not know the mechanisms by which PATJ and Crumbs could regulate these processes in endothelial cells. The hypothesis of this work is that PATJ participates together with Crumbs in the processes of permeabilization, migration and angiogenesis of blood capillaries by modulating the actin cytoskeleton. To study the potential relationship between PATJ and the actin cytoskeleton, three objectives have been set: 1. To study the expression of different components of the cytoskeleton in endothelial cells depleted of PATJ, 2. To determine the ratio of filamentous/globular actin dependent on the expression of PATJ and 3. To study the expression levels of the YAP/TAZ proteins in the nucleus and in the cytosol dependent on the expression of PATJ. By using techniques as western blot, immunofluorescence and cell subfractionation, we have observed that in endothelial cells the underexpression of PATJ decreases the F/G actin ratio and promotes the translocation of the YAP/TAZ transcription co-factors to the nucleus, thus demonstrating the role of PATJ in the regulation of the actin cytoskeleton and its possible relationship with the Hippo pathway

[cat] L'ictus és una malaltia cardiovascular que comporta una de les causes principals tant de mortalitat com de discapacitat en adults a Espanya. Suposa a més a més una gran càrrega tant econòmica com sanitària. Estudis recents han descobert que la variant rs76221407 del gen PATJ està associada a pitjor pronòstic funcional en pacients després de patir un ictus isquèmic. El grup receptor va observar que després de l'ictus es produeix una infraexpressió de PATJ, i que aquesta sembla promoure canvis morfològics a les cèl·lules endotelials a favor de processos de migració cel·lular i angiogènesi. PATJ és una proteïna de bastiment que, juntament amb el complex Crumbs, regula la polaritat cel·lular i participa en la formació de les unions oclusives. Actualment no coneixem els mecanismes pels quals PATJ i Crumbs podrien regular aquests processos en cèl·lules endotelials. La hipòtesi d'aquest treball és que PATJ participa juntament amb Crumbs en els processos de permeabilització, migració i angiogènesi dels capil·lars sanguinis mitjançant la modulació del citoesquelet d'actina. Per estudiar la relació potencial entre PATJ i el citoesquelet d'actina s'han plantejat tres objectius: 1. Estudiar l'expressió de diferents components del citoesquelet en cèl·lules endotelials deplecionades de PATJ, 2. Determinar la ràtio d'actina filamentosa/ globular dependent de l'expressió de PATJ i 3. Estudiar els nivells d'expressió de les proteïnes YAP/TAZ al nucli i al citosol dependent de l'expressió de PATJ. Mitjançant l'ús de tècniques de western blot, immunofluorescència i subraccionament cel·lular, en aquest treball s'ha comprovat que la infraexpressió de PATJ disminueix la ràtio d'actina F/G i promou la translocació dels cofactors de transcripció YAP/TAZ al nucli en cèl·lules endotelials, demostrant així el paper de PATJ en la regulació del citoesquelet d'actina i la seva possible relació amb la via Hippo