Caracterització de l'expressió de la proteïna PATJ en el procés de diferenciació neuronal de les cèl·lules SH-SY5Y

Abstract

[cat] L’ictus isquèmic representa el 80% dels accidents cardiovasculars i és la segona causa de mort a escala mundial. Aquesta patologia té una important contribució genètica, ja que s’ha vist que un pitjor resultat funcional al cap de tres mesos s’associa a variants intròniques del gen PATJ. La proteïna d’assemblatge PATJ forma part del complex CRUMBS, juntament amb altres proteïnes d’assemblatge PALS1 i CRB (complex respiratori boví). El complex CRUMBS estableix unions cel·lulars oclusives i es troba implicat en la polarització de les cèl·lules endotelials. Probablement, un pitjor diagnòstic funcional de l’ictus isquèmic sigui degut a una disminució de la polarització cel·lular, disminució dels complexos d’unió o disminució de l’expressió de PALS1. Hipotetitzem que el complex CRUMBS intervé en la polaritat neuronal amb l’objectiu de demostrar que PATJ i el complex CRUMBS dirigeixen la polarització neuronal en el model cel·lular de neuroblastoma humà SH-SY5Y. En el present estudi, la diferenciació de SH-SY5Y fou induïda amb àcid retinoic durant cinc dies i l’addició del factor neurotròfic derivat del cervell al cinquè dia. Es varen anar recollint mostres als diferents punts del curs temporal que posteriorment foren analitzades per RT-PCR i WB per tal d’analitzar l’expressió de PATJ. Els resultats en SH-SY5Y diferenciades amb AR indiquen que un increment de l’expressió de PATJ al llarg del procés de diferenciació neuronal, tant a nivell d’ARNm com de proteïna. No obstant això, l’estimulació amb BDNF al cinquè dia suposa una disminució en la quantitat de proteïna PATJ mentre que l’expressió per RT-PCR es manté igual. Això podria posar de manifest l’activació de mecanismes de regulació postraduccionals i postranscripcionals, com per exemple el miARN.

[spa] El ictus isquémico representa el 80% de los accidentes cardiovasculares y es la segunda causa de muerte a nivel mundial. Esta patología tiene una importante contribución genética puesto que se ha visto que un peor resultado funcional a los tres meses se asocia a variantes intrónicas del gen PATJ. La proteína de ensamblaje PATJ forma parte del complejo CRUMBS, junto con otras proteínas de ensamblaje PALS1 y CRB (complejo respiratorio vacuno). El complejo CRUMBS establece uniones celulares oclusivas y está implicado en la polarización de las células endoteliales. Probablemente un peor diagnóstico funcional del ictus isquémico se deba a una disminución de la polarización celular, disminución de los complejos de unión o disminución de la expresión de PALS1. Hipotetizamos que el complejo CRUMBS interviene en la polaridad neuronal con el objetivo de demostrar que PATJ y el complejo CRUMBS dirigen la polarización neuronal en el modelo celular de neuroblastoma humano SH-SY5Y. En el presente estudio, la diferenciación de SH-SY5Y fue inducida con ácido retinoico durante cinco días y la adición del factor neurotrófico derivado del cerebro al quinto día. Se fueron 6 recogiendo muestras en los diferentes puntos del curso temporal que posteriormente fueron analizadas por RT-PCR y WB para analizar la expresión de PATJ. Los resultados en SH-SY5Y diferenciadas con AR indican un incremento de la expresión de PATJ a lo largo del proceso de diferenciación neuronal, tanto a nivel de ARNm como de proteína. Sin embargo, la estimulación con BDNF en el quinto día supone una disminución en la cantidad de proteína PATJ mientras que la expresión por RT-PCR se mantiene igual. Esto podria poner de manifiesto la activación de mecanismos de regulación postraduccionales y postranscripcionales, como el miARN.

[eng] Ischemic stroke accounts for 80% of cardiovascular accidents and is the second leading cause of death worldwide. This pathology has an important genetic contribution since it has been shown that a worse functional result at three months is associated with intronic variants of the PATJ gene. The PATJ assembly protein is part of the CRUMBS complex, along with other PALS1 and CRB (bovine respiratory complex) assembly proteins. The CRUMBS complex establishes occlusive cell bonds and is involved in the polarization of endothelial cells. A worse functional diagnosis of ischemic stroke is probably due to decreased cell polarization, decreased binding complexes, or decreased PALS1 expression. We hypothesize that the CRUMBS complex is involved in neuronal polarity in order to demonstrate that PATJ and the CRUMBS complex direct neuronal polarization in the human neuroblastoma cell model SH SY5Y. In the present study, SH-SY5Y differentiation was induced with retinoic acid for five days and addition of brain-derived neurotrophic factor on day five. Samples were collected at the different points of the temporal course and subsequently analyzed by RT-PCR and WB to analyze the expression of PATJ. The results in SH-SY5Y differentiated with RA indicate an increase in PATJ expression throughout the neuronal differentiation process, both at the mRNA and protein levels. However, stimulation with BDNF on day 5 results in a decrease in the amount of PATJ protein while expression by RT-PCR remains the same. This could evidence the activation of post-translational and post-transcriptional regulatory mechanisms, such as miRNA.