Caracterización del contenido en microRNA de vesículas extracelulares derivadas de concentrados de plaquetas

Abstract

[spa] Las vesículas extracelulares (VE) son nanopartículas heterogéneas y membranosas secretadas por las células, con una función biológica asociada a la comunicación celular. Dada su participación en la regulación de los procesos biológicos y su capacidad de transporte de moléculas de interés, las VE han emergido como potenciales agentes terapéuticos. Recientemente, las VE derivadas de plaquetas (P-VE) han adquirido gran interés como sustitutivo de las terapias basadas en concentrados de plaquetas en el tratamiento de heridas. Con el objetivo de contribuir al estudio de esta aplicación, se aislaron y caracterizaron P-VE derivadas de diferentes concentrados de plaquetas (lisados de plaquetas (LP), plasma rico en plaquetas fresco (fPRP) y plasma rico en plaquetas envejecido (ePRP)) haciendo uso de técnicas como la cromatografía por exclusión de tamaño (SEC), el análisis de rastreo de nanopartículas (NTA), microscopía electrónica de transmisión (TEM) o Western blot. La capacidad funcional de las P-VE obtenidas se evaluó mediante el ensayo de wound healing y su contenido en microRNA (miR) se determinó mediante microarrays. Los resultados evidencian el correcto aislamiento y caracterización de las P-VE a partir de las diferentes muestras y una mayor capacidad funcional de las P-VE derivadas de lisados de plaquetas (LP) en el cierre de heridas in vitro. Además, la aplicación de los diferentes tratamientos de P-VE no revela efectos citotóxicos ni alteraciones en la viabilidad celular. Asimismo, se observa un perfil diferencial en el contenido de miR entre las VE derivadas de LP y aquellas derivadas de ePRP. Una mayor investigación será necesaria para continuar evaluando la aplicabilidad de las VE en el ámbito clínico, tanto por su utilidad como biomarcadores como por su capacidad de transporte de moléculas de interés.

[eng] Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous, membranous nanoparticles secreted by cells, with a biological function associated to cellular communication. Given their involvement in the regulation of biological processes and their ability to transport molecules of interest, EVs have emerged as potential therapeutic agents. Recently, platelet-derived EVs (P-VEs) have gained great interest as a substitute for platelet concentrate-based therapies for wound treatment. In order to contribute to the study of this application, P-VE derived from different platelet concentrates (platelet lysates (PL), fresh platelet-rich plasma (fPRP) and aged platelet-rich plasma (ePRP) were isolated and characterized using techniques such as size exclusion chromatography (SEC), nanoparticle tracking analysis (NTA), transmission electron microscopy (TEM) or Western blot. The functional capacity of the obtained P-VEs was evaluated by wound healing assay and their microRNA (miR) content was determined by microarrays. The results show the correct isolation and characterization of P-VE from the different samples and a higher functional capacity of P-VE derived from platelet lysates (PL) in wound closure in vitro. Furthermore, the application of the different P-VE treatments does not reveal cytotoxic effects or alterations in cell viability. Also, a differential profile in miR content is observed between LP-derived EVs and those derived from ePRP. Further research will be necessary to continue evaluating the applicability of EVs in the clinical setting, both for their utility as biomarkers and for their ability to transport molecules of interest.