Vesículas extracelulares derivadas de plaquetas para su uso terapéutico: evaluación de diferentes concentrados de plaquetas como fuente de obtención.

Abstract

[spa] En los últimos años se han evaluado diferentes concentrados de plaquetas (PCs, de sus siglas en inglés platellet concentrates) como fuente de obtención para el aislamiento de vesículas extracelulares derivadas de plaquetas (pEVs, de sus siglas en inglés platellet extracellular vesicles) para su uso en medicina regenerativa. El aislamiento y caracterización de este tipo de vesículas extracelulares (EVs) fue realizado a partir de tres PCs (lisado de plaquetas (LP), plaquetas jóvenes (PJ) y plaquetas envejecidas (PE)) usando la técnica de análisis por rastreo de nanopartículas (NTA, de sus siglas en inglés Nanoparticle Tracking Analysis), cromatografía por exclusión por tamaño (SEC, de sus siglas en inglés Size Exclusion Cromatography), microscopio de transmisión electrónica (TEM, de sus siglas en inglés Transmision Electron Microscopy) y western blot (WB). Los efectos terapéuticos de las pEVs aisladas de los diferentes PC se evaluaron in vitro mediante un ensayo de cierre de herida (wound healing - WH), realizando además un ensayo de citotoxicidad (actividad LDH), un ensayo de actividad metabólica y por último fueron cuantificados los niveles de expresión génica de las células ante el tratamiento a través de una RT-PCR en tiempo real (RT-qPCR). Entre los PC usados las pEVs derivadas del LP (pEVs-LP) son las que exponen una mayor capacidad regenerativa aumentando el cierre de herida. En definitiva, varios estudios son necesarios para continuar confirmando el papel que juegan las pEVs en el WH y su posible uso futuro como herramienta terapéutica.

[cat] En els últims anys s'han avaluat diferents concentrats de plaquetes (PCs, de les seves sigles en anglès platellet concentrates) com a font d'obtenció per a l'aïllament de vesícules extracelul·lars derivades de plaquetes (pEVs, de les seves sigles en anglès platellet extracellular vesicles) per al seu ús en medicina regenerativa. L'aïllament i caracterització d'aquesta mena de vesícules extracelul·lars (EVs) va ser realitzat a partir de tres PCs (lisat de plaquetes (LP), plaquetes joves (PJ) i plaquetes envellides (PE)) usant la tècnica d'anàlisi per rastreig de nanopartícules (NTA, de les seves sigles en anglès Nanoparticle Tracking Analysis), cromatografia d’exclusió per tamany (SEC, de les seves sigles en anglès Size Exclusion Cromatography), microscopia de transmissió electrònica (TEM, de les seves sigles en anglès Transmission Eletron Microscopy) i western blot (WB). Els efectes terapèutics de les pEVs aïllades dels diferents PCs es van evaluar in vitro mitjançant un assaig de tancament de ferida (wound healing - WH), a més, realitzant un assaig de citotoxicitat (activitat LDH), un assaig d'activitat metabòlica i finalment van ser quantificats els nivells d'expressió gènica de les cèl·lules davant el tractament a través d'una RT-PCR en temps real (RT-qPCR). Entre els PCs usats les pEVs derivades del LP (pEVs-LP) són les que exposen una major capacitat regenerativa augmentant el tancament de ferida. En definitiva, diversos estudis són necessaris per a continuar confirmant el paper que juguen les pEVs en el WH i el seu possible ús futur com a eina terapèutica.

[eng] In recent years, different platelet concentrates (PC) have been evaluated as a source of obtaining for the isolation of platelet-derived extracellular vesicles (pEVs) for use in regenerative medicine. The isolation and characterization of this type of extracellular vesicles (EVs) was performed from three PCs (platelet lysate (LP), young platelets (PJ) and aged platelets (PE)) using the Nanoparticle Tracking Analysis (NTA), Size Exclusion Chromatography (SEC), Transmission Electron Microscopy (TEM) and western blot (WB). The therapeutic effects of the pEVs isolated from the different PCs were evaluated in vitro by means of a wound healing assay (WH), also performing a cytotoxicity assay (LDH activity), a metabolic activity assay, and finally they were quantified the gene expression levels of the cells before the treatment through an RT-PCR in real time (RT-qPCR). Among the PCs used, the pEVs derived from the LP (pEVs-LP) are those that exhibit a greater regenerative capacity, increasing wound closure. In short, several studies are necessary to continue confirming the role that pEVs play in WH and their possible future use as a therapeutic tool.