Exploració de les vesícules extracel·lulars com a eina de diagnòstic i pronòstic de sèpsia

Abstract

[cat] La sèpsia és una síndrome potencialment mortal causada per una resposta desregulada per part de l’organisme enfront a una infecció, la qual compromet seriosament la funcionalitat dels òrgans. La seva detecció a temps, abans de la disfunció multiorgànica, comporta grans beneficis per als pacients. Malauradament, l’absència de biomarcadors específics i la variabilitat de símptomes entre pacients dificulten un diagnòstic precoç. En els darrers anys, les vesícules extracel·lulars (EVs) han despertat un gran interès com a possible biomarcador degut al seu paper clau en la comunicació intercel·lular en condicions fisiològiques i patològiques. Estudis previs mostren que durant la sèpsia es produeix una disminució de l’expressió del hsa-miR-204-5p contingut en EVs en comparació a pacients sans. Atenent les necessitats clíniques, l’objectiu del present treball va ser avaluar les característiques de les EVs i el seu contingut en hsa-miR-204-5p en pacients sèptics i pacients no sèptics en estat greu, definits com a control d’urgències. Les EVs es van aïllar per cromatografia d’exclusió per pes molecular a partir de mostres de plasma i es van caracteritzar mitjançant una anàlisi de seguiment de nanopartícules (NTA), microscòpia de transmissió electrònica (TEM) i citometria de flux per marcadors transmembrana d’EVs. A partir del RNA total de les EVs es va realitzar una RT-qPCR per quantificar els nivells d’expressió del hsa-miR-204-5p. Els resultats obtinguts mostren una concentració de EVs significativament major en pacients sèptics i un perfil d’expressió de marcadors transmembrana diferent entre ambdós grups de pacients. Aquests resultats suggereixen que, si bé l’expressió del hsa-miR-204-5p no permet diferenciar aquests pacients, la concentració i els marcadors de EVs podrien ser una bona eina per al diagnòstic de sèpsia.

[eng] Sepsis is a life-threatening syndrome caused by a host dysregulated immune response to infection, which seriously compromises organ function. Early diagnosis of sepsis, before multi-organ dysfunction occurs, improve patients’ outcomes. However, the lack of specific biomarkers and the variability of clinical symptoms among patients makes it challenging. Extracellular vesicles (EVs) have emerged as a promising biomarker as they are a key player in physiological and pathological intercellular communication. Previous studies demonstrate a downregulation of hsa-miR-204-5p contained in EVs in septic patients in comparison with healthy individuals. According to real clinical needs, the aim of the present study was to characterize EVs and their hsa-miR-204-5p content as a diagnostic tool between septic patients and non-septic patients critically ill (defined as urgency control). EVs were isolated from plasma samples by size exclusion chromatography and characterized by Nanoparticle Tracking Analysis (NTA), transmission electronic microscopy (TEM) and flow cytometry for transmembrane EV markers. From total RNA of EVs, a RT-qPCR was performed to quantify the expression levels of hsa-miR-204-5p. The results obtained show a significantly higher concentration of EVs in septic patients together with a different surface markers profile among patients. Our results suggest that although has-miR-204-5p expression cannot allow the differentiation between these groups of patients, the concentration of EVs and its surface markers profile could be a promising diagnostic tool for sepsis.