Desarrollo de un método directo de extracción líquido-líquido combinado con UHPLC-DAD para la determinación de siete flavonoides en aceite de oliva virgen extra de Mallorca-España

Abstract

[spa] El aceite de oliva virgen extra (AOVE) es un aceite de oliva sin refinar, que permite recuperar todo el perfil de sabor y los beneficios nutricionales. Los flavonoides son producto de un metabolismo secundario que sucede de manera natural en el reino vegetal. Tienen un fuerte comportamiento antioxidante que conduce a la prevención y protección de una amplia variedad de enfermedades. Su tipo y concentración difieren según el tipo de aceituna y las condiciones de plantación, geográficas, de almacenamiento y de prensado de la aceituna. En este trabajo, se ha desarrollado una técnica directa de extracción líquida-líquida (LLE) para la extracción rápida de 7 flavonoides principales, rutina, luteolina, isorhoifolina, taxifolina, kaempferol, apigenina e isorhamnetina, en muestras de AOVE. En este contexto, se extrajeron directamente 10 mL de muestra de AOVE con 0,5 mL de metanol durante 15 min de sonicación. Esta metodología fue optimizada y validada empleando como análisis instrumental la cromatografía liquida (UHPLC) acoplada a un detector de diodos (DAD) para la identificación y cuantificación de compuestos flavonoides en AOVE. Para este propósito, se utilizó una columna C18 con la combinación de fase móvil ACN y agua acidificada (pH = 3,6) en gradiente. La separación de los flavonoides se realizó en un total de 28 min. El método propuesto facilita la medición simultánea de los siete flavonoides mencionados, con buena resolución entre pares de picos y alta sensibilidad, LODs entre 0,27 y 0,81 ug mL-1 y LOQs entre 0,84 y 2,4 µg mL-1 , adicionalmente el método demostró un porcentaje de recuperación entre 73 y 117 %. Se alcanzó un factor de preconcentración de 20, mientras que los factores de enriquecimiento variaron entre 10 y 15. Por último, se aplicó el método a tres muestras comerciales de AOVE producidos en Mallorca. En la muestra de la variedad arbequina se encontraron 6 de los 7 estudiados, e.g., taxifolin, isorhoifolin, luteolina, kaempferol, apigenina e isorhamnetin, mientras que en la muestra de Arbequia-Picual se encontró la presencia solo de tres flavonoides, e.g., taxifolin, luteolina y apigenina, y, por último, la variedad Coupage presentó los flavonoides luteolina, kaempferol y apigenina.

[eng] Extra virgin olive oil (EVOO) is unrefined olive oil, which allows the full flavor profile and nutritional properties of olive oil to be recovered. Flavonoids are the product of a secondary metabolism that occurs naturally in the plant kingdom. They have a strong antioxidant behavior that leads to the prevention and protection of various diseases. Their type and concentration differ according to the kind of olive and the planting, geographical, storage, and pressing conditions of the olive. In this work, a direct liquid-liquid extraction (LLE) technique has been developed for the rapid extraction of 7 main flavonoids, rutin, luteolin, isorhoifolin, taxifolin, kaempferol, apigenin, isorhamnetin, from EVOO samples. In this context, 10 mL of EVOO sample was directly extracted with 0.5 mL of methanol during 15 min of sonication. This methodology was optimized and validated using diode array (DAD) liquid chromatography (UHPLC) for the identification and quantification of flavonoid compounds in EVOO. For this purpose, a C18 column was used with the combination of mobile phase ACN and acidified water (pH = 3.6) in gradient. The separation of the flavonoids was performed in a total of 28 min. The proposed method allows the simultaneous determination of the seven mentioned flavonoids, with good resolution between peak pairs and high sensitivity, LOD ≤0.05 ug mL-1 with RSD ≤2.5%, additionally the method demonstrated a recovery percentage between 70 and 110 %. A preconcentration factor of 20 was achieved, while enrichment factors varied between 10 and 15. Finally, the method was applied to 3 commercial samples of extra virgin olive oil produced in Mallorca. The analysis showed 6 of the 7 flavonoids in the Arbequina samples, e.g., taxifolin, isorhoifolin, luteolin, kaempferol, apigenin, and isorhamnetin). In the case of Arbequia-Picual, the presence of the following flavonoids was found: taxifolin, luteolin, and apigenin, and finally, the Coupage variety showed the following flavonoids: luteolin, kaempferol, and apigenin.