Análisis del clicocálix y la respuesta inflamatoria de la microvasculatura cerebral aplicado al ictus isquémico

Abstract

[spa] La microvasculatura cerebral, y en particular el glicocálix endotelial, desempeñan un papel esencial en la integridad de la barrera hematoencefálica y en la respuesta inflamatoria en patologías como el ictus isquémico. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y evaluar un protocolo metodológico para el aislamiento, visualización y análisis molecular de la microvasculatura cerebral en ratón, centrado en la caracterización del glicocálix y de marcadores de activación endotelial. Se compararon dos métodos de aislamiento vascular (gradiente de densidad e inmunocaptura antiCD31) y se aplicaron técnicas de microscopía confocal, Western blot y ELISA en condiciones basales. El protocolo por gradiente de densidad permitió una mejor preservación de la arquitectura vascular. Sin embargo, la detección de marcadores moleculares fue limitada por la baja expresión basal, la sensibilidad de los ensayos y el volumen restringido de muestra. A pesar de estas limitaciones, los resultados obtenidos proporcionan una base sólida para la aplicación futura del protocolo en modelos patológicos. Esta aproximación metodológica podría facilitar el estudio del glicocálix cerebral y contribuir al desarrollo de estrategias diagnósticas y terapéuticas dirigidas a preservar la función endotelial

[cat] La microvasculatura cerebral, i en particular el glicocàlix endotelial, exerceixen un paper essencial en la integritat de la barrera hematoencefàlica i en la resposta inflamatòria en patologies com l’ictus isquèmic. L’objectiu d’aquest treball va ser desenvolupar i avaluar un protocol metodològic per a l’aïllament, visualització i anàlisi molecular de la microvasculatura cerebral en ratolí, centrat en la caracterització del glicocàlix i de marcadors d’activació endotelial. Es van comparar dos mètodes d’aïllament vascular (gradient de densitat i inmunocaptura anti-CD31) i es van aplicar tècniques de microscòpia confocal, Western blot i ELISA en condicions basals. El protocol per gradient de densitat va permetre una millor preservació de l’arquitectura vascular. Tanmateix, la detecció de marcadors moleculars va ser limitada per l’expressió basal baixa, la sensibilitat dels assaigs i el volum restringit de mostra. Malgrat aquestes limitacions, els resultats obtinguts proporcionen una base sòlida per a l’aplicació futura del protocol en models patològics. Aquesta aproximació metodològica podria facilitar 6 l’estudi del glicocàlix cerebral i contribuir al desenvolupament d’estratègies diagnòstiques i terapèutiques dirigides a preservar la funció endotelial

[eng] The cerebral microvasculature, and particularly the endothelial glycocalyx, play a key role in maintaining the integrity of the blood-brain barrier and mediating the inflammatory response in conditions such as ischemic stroke. The aim of the present study was to develop and evaluate a methodological protocol for the isolation, visualization, and molecular analysis of the cerebral microvasculature in mice, focusing on the characterization of the glycocalyx and endothelial activation markers. Two vascular isolation methods (density gradient and anti-CD31 immunocapture) were compared, and confocal microscopy, Western blot, and ELISA techniques were applied under baseline conditions. The density gradient protocol enabled a better preservation of vascular architecture. However, the detection of molecular markers was limited due to low basal expression, assay sensitivity, and restricted sample volume. Despite these limitations, the results provide a solid foundation for the future application of the protocol in pathological models. This methodological approach could facilitate the study of the cerebral glycocalyx and contribute to the development of diagnostic and therapeutic strategies aimed at preserving endothelial function