Papel de RhoE en la regulación del citoesqueleto, la adhesión y la motilidad celular en Gliomas

Abstract

Los gliomas representan los tumores cerebrales primarios más frecuentes, pudiéndose clasificar en cuatro grados de malignidad en función de sus características histológicas. Entre estos tumores se encuentran los glioblastomas, que constituyen los gliomas de mayor grado descritos, caracterizados por ser altamente agresivos y heterogéneos. Uno de los mayores problemas que comportan estas neoplasias es su resistencia a los tratamientos disponibles, considerándose tumores incurables, de forma que la mayoría de los pacientes fallecen al cabo de un año tras el diagnóstico. Parte de esta resistencia es debida a su elevada capacidad invasiva, lo cual dificulta la resección quirúrgica completa de dichos tumores. En este proceso juegan un papel importante las proteínas pertenecientes a la familia de las Rho GTPasas, destacando entre ellas la proteína RhoE, la cual está implicada en control del ciclo celular y de la dinámica del citoesqueleto, promoviendo la motilidad celular. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto del silenciamiento de RhoE sobre la estructura del citoesqueleto, la motilidad y la adhesión celular, haciendo uso de dos líneas celulares: U87MG y LN229. Para ello se llevaron a cabo ensayos de motilidad y adhesión celular, además del análisis de las fibras de estrés y las adhesiones focales a través de la microscopía confocal. Así, se observó que la depleción de RhoE provoca la reducción de la motilidad celular, lo cual se atribuye a un cambio en la morfología celular causado por un incremento en las fibras de estrés y las adhesiones focales. Además, también se pudo apreciar que el silenciamiento de RhoE causa una disminución de la plasticidad de las adhesiones focales, dificultando así la adhesión inicial promovida por los complejos focales. En definitiva, se confirma que RhoE juega un papel importante en la capacidad invasiva de los glioblastomas.

Gliomas are the most common primary brain tumours, and they can be classified into four malignancy grades according to their histological characteristics. Among these tumours we can find glioblastomas, the highest-grade gliomas, which are characterized by being highly aggressive and heterogeneous. One of the greatest problems derived form these neoplasms is their resistance to available treatments, leaving them untreatable. As a consequence, most patients die within one year after diagnosis. Part of this resistance is due to their high invasivity, which makes complete surgical resection very difficult. In this process, proteins belonging to the family of Rho GTPases play a crucial role, among which RhoE is very important, as it is involved in cell cycle control and cytoskeletal dynamics, promoting cell motility. The aim of this study was to analyse the effect of downregulation of RhoE on the structure of cytoskeleton, cell motility and adhesion, using two cell lines: U87MG and LN229. To attain these objectives, wound healing and adhesion assays were conducted, as well as the analysis of stress fibres and focal adhesions through confocal microscopy. It was observed that RhoE depletion causes a reduction of cell motility, which is attributed to a modification of cell morphology produced by an increase in stress fibres and focal adhesions. Furthermore, one could also appreciate that silencing of RhoE causes a decrease in the plasticity of focal adhesions, thus hampering the initial adhesion promoted by focal complexes. Hence, it is confirmed that RhoE plays an important role in invasiveness of glioblastoma.