Estudio preliminar de la vía c-MET en células de tumores de estroma gastrointestinal

Abstract

[esp] Introducción: Los tumores del estroma gastrointestinal (GIST) son los tumores mesenquimales más frecuentes del tracto gastrointestinal y se caracterizan por una mutación activadora específica en los genes que codifican para los receptores tirosina quinasa (RTK), c-­‐KIT y PDGFR-­‐α. Aunque los GIST son inicialmente sensibles a imatinib u otros inhibidores de receptores tirosina quinasa, se desarrolla resistencia al fármaco por lo que se requiere nuevas estrategias para la terapia. Los objetivos de este trabajo fueron en primer lugar realizar una búsqueda de los antecedentes bibliográficos sobre la implicación de c-­‐MET en GIST y en sarcomas de partes blandas frente a otro tipo de cánceres. En segundo lugar, evaluar la expresión de c-­‐MET (fosforilado y total) en diferentes líneas de GIST y de sarcomas de partes blandas, así como su activación o inhibición mediante el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) o el inhibidor específico de c-­‐MET PHA-­‐665752, respectivamente. Materiales y métodos: Se utilizaron diferentes líneas celulares de GIST y de sarcomas de partes blandas. Las células fueron estimuladas con diferentes concentraciones de HGF (20 y 40 ng/ml) durante 5 minutos o pretratadas con PHA-­‐665752 1 μM durante 1 hora antes de la activación. La expresión de c-­‐MET activado y total se determinó mediante inmunoblot. Resultados y discusión: Se observó expresión de c-­‐MET en todas las líneas de GIST y sarcomas de partes blandas estudiadas. Los niveles de c-­‐MET activado fueron elevados en la línea de leiomiosarcoma SK-­‐UT-­‐1 y la línea GIST BI, siendo bajos en el resto de líneas. En las células de fibrosarcoma HT-­‐1080 y GIST 48, HGF activó c-­‐MET de manera dependiente de la dosis. La activación paralela de AKT y ERK1/2 por HGF indicaron que la señalización mediada por c-­‐MET estaba activa. Finalmente, la activación de c-­‐MET y de su efector AKT por HGF fue inhibida por el inhibidor de c-­‐MET, PHA-­‐665752 en células HT-­‐1080. Conclusión: El nivel de activación de c-­‐MET fue muy heterogéneo en las distintas líneas de GIST y sarcomas de partes blandas estudiadas, a pesar de formar parte del mismo subtipo de sarcomas. La activación de c-­‐MET y de su vía de señalización celular en la línea GIST 48 por HGF sugiere su implicación en la supervivencia de este tipo de células tumorales y abre la posibilidad de considerar a los inhibidores específicos de c-­‐MET como una posible estrategia terapéutica en este tipo de tumores.

[eng] Introduction. Gastrointestinal stromal tumors (GISTs) are the most frequent mesenchymal tumors of the gastrointestinal tract and are characterized by specific activating mutation in genes coding for the receptor tyrosine kinases (RTKs) c-­‐KIT and PDGFR-­‐α. Although GISTs are often initially sensitive to imatinib or other tyrosine kinase receptor inhibitors, resistance generally develops, necessitating new strategies for therapy. The objectives of this study were first to search for bibliographic records regarding the involvement of c-­‐MET in GIST and soft tissue sarcomas compared to other types of cancers. Secondly, to evaluate the expression of c-­‐ MET (phosphorylated and total) in different lines of GIST and soft tissue sarcomas as well as their activation or inhibition by hepatocyte growth factor (HGF) or specific inhibitor of c-­‐MET PHA-­‐665752, respectively. Materials and methods: Different GIST and soft tissue sarcomas cell lines were used. Cells were stimulated with several concentrations of HGF (20 and 40 ng/ml) for 5 minutes or pre-­‐treated with PHA-­‐665752 1 μM for 1 hour prior to activation. The expression of activated and total c-­‐MET was determined by immunoblot. Results and discussion: c-­‐MET expression was observed in all lines of GIST and soft tissue sarcomas studied. The activated c-­‐MET levels were high in SK-­‐UT-­‐1 leiomyosarcoma and GIST BI lines and low in the remaining lines. In the HT-­‐ 1080 fibrosarcoma and GIST 48 cell lines, HGF activated c-­‐MET dose dependent manner. Parallel activation of AKT and ERK1/2 by HGF indicated that c-­‐MET-­‐mediated signaling was activated. Finally, activation of c-­‐MET and its effector, AKT, by HGF were inhibited by c-­‐MET inhibitor PHA-­‐665752 in HT-­‐1080 cells. Conclusion: The c-­‐ MET activation level was very heterogeneous in the different GIST and soft tissue sarcomas cell lines studied, despite being part of the same subtype of sarcomas. Activation of c-­‐MET and its signaling pathway in GIST 48 line by HGF suggests their involvement in the survival of this type of tumor cells and shows the possibility of considering specific inhibitors of c-­‐MET as a potential therapeutic strategy in this type of tumors.